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　　人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒使用說明書

　　BS-0203-A  人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA 試劑盒  96T

　　BS-0203-B  人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA 試劑盒  48T

　　一、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清中的GLP-1水平。其核心步驟包括：

　　固相抗體包被?：微孔板預(yù)包純化抗GLP-1單克隆抗體。

　　抗原-抗體結(jié)合?：樣本中GLP-1與固相抗體結(jié)合，再加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗形成復(fù)合物。

　　顯色反應(yīng)?：加入底物TMB顯色，酸終止后于450nm波長測定吸光度，濃度與顯色深度成正比?。

　　二、試劑盒組成

　　組分 規(guī)格 備注

　　預(yù)包被微孔板 12孔×8條 含抗GLP-1抗體

　　標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml/瓶 凍干粉，需復(fù)溶

　　HRP標(biāo)記二抗 6ml 避光保存

　　顯色底物(TMB) A液6ml+B液6ml 現(xiàn)用現(xiàn)配

　　終止液 6ml 2M硫酸

　　濃縮洗滌液 20ml 需1:20稀釋

　　樣本xishi液 6ml 含穩(wěn)定劑

　　注?：不同品牌組分可能存在差異，詳見具體說明書。

　　三、樣本處理

　　1. 樣本類型

　　血清/血漿?：EDTA或肝素抗凝，離心取上清。

　　細(xì)胞上清?：1000×g離心20分鐘去除雜質(zhì)。

　　組織勻漿?：裂解后離心取上清。

　　2. 保存條件

　　短期?：2-8℃保存≤48小時。

　　長期?：分裝后-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。

　　3. 稀釋建議

　　常規(guī)樣本?：推薦稀釋5-20倍(如取20μL樣本+180μL稀釋液)。

　　高濃度樣本?：需預(yù)實驗確定稀釋倍數(shù)，最高稀釋100000倍(三步稀釋法)。

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品配制?

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品加1mL稀釋液復(fù)溶，混勻后靜置10分鐘。

　　進(jìn)行系列稀釋(如8pmol/L→4pmol/L→…→0.5pmol/L)。

　　加樣?

　　標(biāo)準(zhǔn)孔：50μL/孔。

　　樣本孔：先加40μL稀釋液，再加10μL樣本(總稀釋5倍)。

　　空白孔：不加樣本及二抗。

　　孵育?

　　37℃孵育120分鐘，洗板3次(每次浸泡1分鐘)。

　　顯色與終止?

　　每孔加TMB顯色液100μL，37℃避光孵育15分鐘。

　　加終止液50μL終止反應(yīng)，30分鐘內(nèi)測OD值。

　　五、注意事項

　　樣本避免?：溶血、高脂樣本及含NaN3的樣本(抑制HRP活性)。

　　試劑平衡?：使用前室溫平衡20分鐘，濃縮洗滌液需40℃水浴溶解結(jié)晶。

　　質(zhì)量控制?：建議設(shè)置復(fù)孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2應(yīng)≥0.95。

　　六、結(jié)果分析

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以O(shè)D值對濃度繪制四參數(shù)方程。

　　濃度計算?：樣本OD值代入曲線方程，再乘以稀釋倍數(shù)。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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